分子间相互作用

 

等温量热滴定（ITC）
1.简介：
将一种反应物置于一个温控样品池中 ，并通过一个热电偶回路与参比池相偶联，样品池和参比池处于相同的外部环境，特定的滴定剂（按试验需求选择）定量滴加到样品池中，当样品与滴定剂发生反应时，样品池与参比池的温度会发生变化，反应变化的能量可以被灵敏的检测到，并通过正反馈或负反馈触发恒温装置保持温度恒定。
2.适用范围：
核酸-小分子、生物分子-细胞相互作用、酶促反应动力学等，可以检测任意两种小分子之间的结合力，要求检测样品的纯度高。
3.测试参数：
结合常数KD、化学计量比n、热力学参数dH，dS。
4.送样须知：
提供最少样品量：蛋白2mg，小分子10mM/500ul，样品浓度越高越好，蛋白多肽需低温寄送。
5.交付内容：
原始数据及曲线图。

生物膜干涉（BLI）
1.简介：
生物膜干涉技术采用探针式生物传感器对样品直接进行检测，对检测样品无需做任何荧光或同位素标记。通过仪器发射白光到传感器表面并收集反射光，不同频率的反射光谱受到生物传感器的光膜层厚度的影响并形成干涉。因此，结合到传感器表面的分子一旦有数量上的增减，光谱仪便会实时地检测到干涉光谱的位移，而这种位移可直接反应出传感器表面生物膜的厚度及密度变化，从而对待测分子间的相互作用过程进行精确的定量测定。
2.适用范围：
任意两种小分子，其中一个需要有氨基（所有的蛋白都有），带氨基的样品要纯度高，另一个没要求。
3.测试参数：
结合常数KD、结合速率常数Ka、解离速率常数Kd。
4.送样须知：
需提供最少样品量：蛋白1mg，小分子100mM/1mL，蛋白多肽需低温寄送。
5.交付内容：
原始数据及曲线图。

光学表面等离子共振（SPR）
1.简介：
先将一种生物分子（靶分子）键合在生物传感器表面，再将含有另一种能与靶分子产生相互作用的生物分子（分析物）的溶液注入并流经生物传感器表面。生物分子间的结合引起的变化即被观察到。
2.适用范围：
蛋白-蛋白、抗体-抗原、蛋白-小分子、抗体-多肽、蛋白-DNA、DNA-DNA、蛋白-纳米材料等分子间相互作用力，检测样品中须有一种是蛋白，且两种样品纯度要求均高。
3.测试参数：
结合常数KD、结合速率常数Ka、解离速率常数Kd。
4.送样须知：
提供最少样品量：蛋白50-100μg，小分子20μM/200μL，蛋白多肽需低温寄送。
5.交付内容：
原始数据及曲线图。

微量热泳动（MST）
1.简介：
微量热泳动是一种表征生物分子特性的光学方法，是粒子在微观温度梯度中的定向运动。生物分子的质量、电荷、水化层和构象发生改变均可导致分子在温度梯度场中运动速度的变化，这种变化可以用来分析分子间相互作用以及各种化学剂量学参数。将波长为1480 nm 的红外激光照射于荧光激发光路上，通过分色镜照射到毛细管中的样品，样品中的水分子吸收红外光发热而形成温度梯度。MST 仪器通过记录激光器打开前、打开期间和打开后处于温度梯度中的样品内部红外激光照射区域的荧光变化情况，从而实现较短时间的测定。 
2.适用范围：
蛋白质-蛋白质（包括抗原-抗体、分子伴侣-底物）、蛋白质-核酸、核酸-核酸、蛋白-小分子（蛋白酶与抑制剂、细胞膜蛋白活性）、蛋白-肽、肽-肽等相互作用，比ITC能检测更微小的相互作用。
3.测试参数：
结合常数KD。
4.送样须知：
需提供最少样品量：蛋白10uM/ 100ul，小分子100uM/200ul，蛋白多肽需低温寄送。
注：为保证试验可靠性，条件允许的情况下尽量多提供一些样品。
5.交付内容：
原始数据及曲线图。
6.试验周期：
具体试验周期请于工作人员联系。

 

ITC：提供最少样品量：蛋白2mg，小分子10mM/500ul，样品浓度越高越好，蛋白多肽需低温寄送。
BLI：任意两种小分子，其中一个需要有氨基（所有的蛋白都有），带氨基的样品要纯度高，另一个没要求。
SPR：提供最少样品量：蛋白50-100μg，小分子20μM/200μL，蛋白多肽需低温寄送。
MST：需提供最少样品量：蛋白10uM/ 100ul，小分子100uM/200ul，蛋白多肽需低温寄送。